ABSTRACT Blastocystis sp. is a protist commonly found in stool samples of humans and animals. Biological and genetic factors of this organism remain controversial. The present study aimed to develop and implement the Blastocystis in vitro culture of Brazilian human isolates for routine use. The fecal isolates (n = 20) were maintained in our laboratory by several passages in Pavlova's medium. Cultures were monitored every 72 h by light microscopy. Genomic DNA was extracted to identify the subtypes (STs). In most isolates, the vacuolar form was prevalent. The amoeboid, granular and cystic forms were observed during in vitro cultivation. STs 1, 2, 3, 4 and 7 were identified. Our preliminary results show the generation time and forms present in the in vitro culture of Blastocystis subtypes isolated from Brazilian human isolates. Therefore, we emphasize the use of in vitro culture as a tool in future studies for the better understanding of the biological aspects of Blastocystis sp.

RESUMO Objetivo: Descrever um caso incomum de infecção por Strongyloides stercoralis (S. stercoralis) em paciente de quatro meses de idade e ressaltar a importância do diagnóstico precoce. Descrição do caso: Paciente masculino, procedente e residente de Videira, Santa Catarina, Brasil, nasceu pré-termo, parto cesárea, peso de nascimento 1.655 g, e permaneceu na Unidade de Terapia Intensiva neonatal e intermediária por 20 dias. Aos quatro meses de idade, começou a evacuar fezes sanguinolentas e foi feita hipótese de alergia à proteína do leite de vaca, em razão da sintomatologia e do uso da fórmula infantil para o primeiro semestre, para o qual foi indicada a substituição por fórmula infantil com proteína hidrolisada. Foram solicitados a pesquisa de leucócitos e o exame parasitológico das fezes). Ambos se mostraram positivos e o parasitológico revelou a presença de larva rabditoide de S. stercoralis. O clínico manteve a hipótese inicial e a dieta, mas solicitou a coleta de três amostras de fezes, que resultaram em uma amostra para larvas rabditoide, em muda, de S. stercoralis. Como a criança apresentava dor abdominal, vômito e as fezes permaneciam sanguinolentas, foi iniciado o tratamento com tiabendazol - duas vezes/dia por dois dias -, repetido após sete dias, e, em seguida, realizado o exame parasitológico de fezes, tendo sido negativo. Comentários: A estrongiloidíase, apesar de ser uma infecção parasitária frequentemente leve, em pacientes imunocomprometidos pode se apresentar de forma grave e disseminada. Deve-se suspeitar desse agente em pacientes que vivem em áreas endêmicas, sendo o diagnóstico estabelecido por meio da pesquisa das larvas do S. stercoralis na secreção traqueal e nas fezes.

ABSTRACT Objective: To describe an uncommon case of infection by Strongyloides stercoralis (S. stercoralis) in a 4-month-old child and to highlight the importance of early diagnosis. Case description: The patient was a male child from the city of Videira, State of Santa Catarina, Southern Brazil, who was born preterm by Cesarean-section, weighing 1,655 g, and stayed in the neonatal intensive care unit for 20 days. At four months of age, the child started presenting blood in stools and the possibility of cow’s milk protein allergy was considered, given the symptoms and the use of infant formula in his 1st semester of life, which was then replaced by infant formula with hydrolyzed protein. White blood cell count and a parasitological stool sample were requested. Both tested positive and the stool ova and parasite examination showed a rhabditoid larva of S. stercoralis. The clinician maintained the initial hypothesis and diet, but requested three new stool samples, which tested positive for rhabditoid larvae of S. stercoralis. Since the child presented abdominal pain and vomiting, and there was still blood in stools, treatment with thiabendazole was initiated twice a day for two days. Treatment was repeated after seven days along with a new parasitological examination, which was then negative. Comments: Although strongyloidiasis is usually a mild parasitic infection, it may be severe and disseminated in immunocompromised patients. This agent must be considered in patients who live in endemic areas, and the diagnosis should be established by searching S. stercoralis larvae in tracheal secretions and in stools.

SUMMARY Strongyloidiasis is a potentially serious infection in immunocompromised patients. Thus, the availability of sensitive and specific diagnostic methods is desirable, especially in the context of immunosuppressed patients in whom the diagnosis and treatment of strongyloidiasis is of utmost importance. In this study, serological and molecular tools were used to diagnose Strongyloides stercoralis infections in immunosuppressed patients. Serum and stool samples were obtained from 52 patients. Stool samples were first analyzed by Lutz, Rugai, and Agar plate culture methods, and then by a quantitative real time polymerase chain reaction (qPCR). Serum samples were evaluated by an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) using a soluble (AS) or a membrane fractions antigen (AM) obtained from alkaline solutions of the filariform larvae of Strongyloides venezuelensis. Of the 52 immunosuppressed patients, three (5.8%) were positive for S. stercoralis by parasitological methods, compared to two patients (3.8%) and one patient (1.9%) who were detected by ELISA using the AS and the AM antigens, respectively. S. stercoralis DNA was amplified in seven (13.5%) stool samples by qPCR. These results suggest the utility of qPCR as an alternative diagnostic tool for the diagnosis of S. stercoralis infection in immunocompromised patients, considering the possible severity of this helminthiasis in this group of patients.

RESUMO O objetivo deste estudo foi avaliar seis frações antigênicas diferentes de fêmeas parasitas de Strongyloides venezuelensis para o diagnóstico sorológico da estrongiloidíase humana. As frações solúveis e de membrana de fêmeas parasitas de S. venezuelensis foram preparadas em solução salina tamponada (SSF e SMF, respectivamente), Tris-HCl (TSF e TMF, respectivamente) e tampão alcalino (ASF e AMF, respectivamente). As amostras de soro obtidas de pacientes com estrongiloidíase, com outras parasitoses e indivíduos saudáveis, foram analisadas pelo ensaio imunoenzimático (ELISA). As frações solúveis SSF, TSF e ASF apresentaram sensibilidade de 85,0%, 75,0%, e 80,0% e especificidade de 93,1%, 93,1% e 87,5%, respectivamente. As frações de membrana, SMF, TMF e AMF demonstraram sensibilidade de 80,0%, 75,0%, e 85,0%, e especificidade de 95,8%, 90,3% e 91,7%, respectivamente. Em conclusão os presentes resultados sugerem que as frações obtidas a partir de fêmeas parasitas, especialmente o SSF e SMF, podem ser utilizadas como fonte alternativa de antígenos no imunodiagnóstico da estrongiloidiase humana.

SUMMARY The aim of this study was to evaluate six different antigenic fractions from Strongyloides venezuelensis parasitic females for the immunodiagnosis of human strongyloidiasis. Soluble and membrane fractions from S. venezuelensis parasitic females were prepared in phosphate-buffered saline (SSF and SMF, respectively), Tris-HCl (TSF and TMF, respectively), and an alkaline buffer (ASF and AMF, respectively). Serum samples obtained from patients with strongyloidiasis or, other parasitic diseases, and healthy individuals were analyzed by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Soluble fractions SSF, TSF, and ASF showed 85.0%, 75.0%, and 80.0% sensitivity and 93.1%, 93.1%, and 87.5% specificity, respectively. Membrane fractions SMF, TMF, and AMF showed 80.0%, 75.0%, and 85.0% sensitivity, and 95.8%, 90.3%, and 91.7% specificity, respectively. In conclusion, the present results suggest that the fractions obtained from parasitic females, especially the SSF and SMF, could be used as alternative antigen sources in the serodiagnosis of human strongyloidiasis.

INTRODUÇÃO: Um dos principais desafios da sociedade tem sido implantar e aperfeiçoar sistemas que realizem a destinação adequada dos resíduos gerados pelas diversas atividades humanas em função da necessidade da preservação ambiental. No Brasil, há obrigatoriedade dos responsáveis de elaborar e implantar seu Plano de Gerenciamento de Resíduos de Serviços de Saúde (PGRSS). OBJETIVO: Este artigo descreve a implantação do PGRSS na Divisão de Laboratório Central do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (DLC/HC-FMUSP), abrangendo a elaboração de planejamento relacionado com os recursos materiais, humanos e da área física. MÉTODO: O processo iniciou com a incorporação do conceito de sustentabilidade ao Sistema Integrado de Gestão (SIG), despertando o interesse em relação a não geração, minimização e reaproveitamento dos RSS, preservação dos recursos naturais e redução do impacto ambiental. CONCLUSÃO: O PGRSS facilitou a comunicação, a disseminação da informação, a conscientização, a formação da competência e o treinamento de todos os envolvidos. Várias atividades foram desenvolvidas simultaneamente, resultando em mudanças comportamentais.

INTRODUCTION: As far as environmental awareness is concerned, one of the main challenges in society has been to implement and optimize systems that perform the appropriate disposal of waste generated by several human activities. In Brazil, both the development and implementation of a Health Services Waste Management Program - HSWMP (Plano de Gerenciamento de Resíduos de Serviços de Saúde [PGRSS]) are legally required. OBJECTIVE: This article describes the implementation of HSWMP in the Central Laboratory Division of University of São Paulo Medical School Hospital - CLD/USP-MSH (Divisão de Laboratório Central do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo [DLC/HC-FMUSP]) comprising material, human and physical area resources. METHOD: The process started with the incorporation of the concept of sustainability into the Integrated Management System - IMS (Sistema Integrado de Gestão [SIG]), which focuses on the non-generation, minimization and recycling of health services waste in order to preserve natural resources and reduce environmental impact. CONCLUSION: The HSWMP facilitated communication, information dissemination, awareness, competence and training of all parties involved. Several activities were conducted simultaneously, which resulted in behavioral changes.

Este é o relato de caso de doente com diarréia crônica causada por Microsporidia. O doente era homem, casado, infectado com HIV e tinha baixa taxa de linfócitos CD4+. O diagnóstico foi feito em exame de fezes utilizando métodos de concentração e técnica de coloração de Gram-Chromotrope. Biópsia de íleo também foi realizada neste caso. O diagnóstico etiológico pode ser feito em laboratório clínico, por técnicas de coloração baseada em cromotrope na rotina da observação microscópica direta.

This is the report on a patient with chronic diarrhea caused by microsporidia. He is married, infected with HIV and has low CD4 cell count. The diagnosis was established through stool parasite search using concentration methods and Gram - chromotrope staining technique. Ileum biopsy was also performed in this case. The etiological diagnosis may be established in a clinical laboratory, by chromotrope staining technique in routine microscopic examination of stool specimens.

Mundialmente, diferentes espécies de Cryptosporidium estão relacionadas com doenças diarréicas. No Brasil há poucos dados sobre os genótipos das espécies de Cryptosporidium associadas a infecções. OBJETIVO: No presente estudo, caracterizamos, por métodos moleculares, a espécie e o genótipo de Cryptosporidium sp diagnosticado em surto diarréico ocorrido na creche do Hospital das Clínicas, São Paulo, Brasil. MATERIAL E MÉTODOS: Identificação específica e tipagem dos isolados associados ao surto foram feitos a partir do seqüenciamento de fragmentos de DNA amplificados por PCR dos seguintes loci: a região que codifica o SSUrRNA, o gene que codifica uma proteína do envoltório dos oocistos de Cryptosporidium (COWP), e o locus de microsatélite ML1, representado por seqüências repetitiva de três nucleotídeos GAG contendo substituições que diferem entre os genótipos de Cryptosporidium parvum e Cryptosporidium hominis. RESULTADOS: Um total de 29 amostras positivas para Cryptosporidium associadas ao surto diarréico foi analisado com base nos métodos moleculares acima descritos. O estudo revelou a presença do genótipo ML1 de Cryptosporidium hominis. DISCUSSÃO: A análise molecular reforçou a hipótese de que a transmissão de Cryptosporidium hominis durante o surto diarréico ocorreu de pessoa a pessoa através da rota fecal oral. Esta é a primeira vez que ferramentas moleculares são utilizadas para identificação de espécies e genótipos de isolados acusando a presença do genótipo ML1 em pacientes brasileiros.

A number of species of Cryptosporidium are associated with diarrhea worldwide. Little data exists regarding the genotypes and species of Cryptosporidium associated with cases of infections in Brazil. PURPOSE: In the present study, we ascertained by molecular methods the species and the genotype of Cryptosporidium sp from a diarrhea outbreak diagnosed in a day care at the Hospital Clínicas, São Paulo University Medical School. MATERIALS AND METHODS: Specific identification and typing of the isolates associated with the outbreak was done by DNA sequencing analysis of fragments amplified by polymerase chain reaction (PCR) from 3 different Cryptosporidium loci: the SSUrRNA coding region, the Cryptosporidium oocyst wall protein (COWP) gene, and the microsatellite locus 1 (ML1), a tandem GAG-trinucleotide repeat containing substitutions that differentiate the genotypes of Cryptosporidium parvum and Cryptosporidium hominis. RESULTS: A total of 29 positive samples from the outbreak were studied by the molecular methods described. Our study revealed the presence of a single genotype of Cryptosporidium hominis in all samples. CONCLUSION: The molecular analysis reinforced the hypothesis that the transmission of Cryptosporidium hominis during the period the samples were collected occurred in an outbreak pattern, possibly by person-to-person contact through the fecal-oral route. As far as we know, this is the first time that molecular tools have been used to identify the species and the genotype of isolates showing the presence of the ML1 genotype in samples from Brazilian patients.

Cyclospora cayetanensis causa diarréia líquida em países tropicais, viajantes e após ingestão de água e alimentos contaminados. Muito pouco é conhecido sobre sua epidemiologia, aspectos patogênicos e reservatórios. No Brasil, sua prevalência é desconhecida com relato de três surtos. Nós relatamos um estudo retrospectivo de 5.015 amostras fecais provenientes de 4.869 pacientes atendidos no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo, SP, Brasil entre abril de 1996 e janeiro de 2002 com detecção de 14 casos de ciclosporíase e prevalência de 0,3%. Deste total 71,4% eram do sexo feminino com idade média de 38 anos. Dez apresentaram sintomatologia, seis tinham níveis de marcadores imunológicos e cinco imunodeficiência.

Cyclospora cayetanensis causes watery diarrhea in tropical countries, among travelers and after ingestion of contaminated water and food. Very little is known about its epidemiology, pathogenic aspects and reservoirs. In Brazil, its prevalence is unknown and to date there have been reports of three outbreaks. We report here a retrospective study of 5,015 stool samples from 4,869 patients attended at Clinical Hospital of the University of São Paulo Medical School, SP, Brazil between April 1996 and January 2002, with 14 cases of Cyclospora cayetanensis being detected there was a prevalence of 0.3%. Of the 14 infected patients, the mean age was 38 years and 71.4% were female. Ten patients presented symptoms; six presented levels of immunological markers and five patients were immunodeficient.

O método de Kato-Katz é muito utilizado para pesquisa de ovos de helmintos nasfezes e, em determinadas ocasiões, como por exemplo no trabalho de campo, afigura-se conveniente preservar o material a examinar, com o intuito de facilitar o transporte e operacionalidade. Na tentativa de poder usar conservador sôliào, capaz de, em relação a ovos de Schistosoma mansoni, manter a morfologia, impedir a evolução e não interferir no processo de clarificação pela glicerina, os autores utilizaram a azida sádica (NaN3), que foi misturada, na quantidade de 2-3mg em aproximadamente 2 g de fezes de pacientes eliminando número conhecido de ovos, quantificados pelo processo de Kato-Katz. As fezes com preservador ficaram mantidas em temperatura ambiente e foram feitas contagens, pela mesma técnica, após uma, duas, quatro, oito e doze semanas. As observações, feitas em 53 amostras, demonstraram que em 51 o número de ovos permaneceu, aproximadamente, idêntico e com estruturas conservadas, de molde a permitir o dignóstico. Em dois casos, nas oitava e décima-segunda semanas, as fezes estavam desidratadas, ressecadas e impróprias para a contagem. A azida sódica, portanto, mostrou-se adequada para a conservação de fezes a serem submetidas ao método de Kato-Katz.

The Kato-Katz technique has been widely employed in the investigation of helminthic eggs in faeces. Sometimes, however, stool specimens must be preserved, specially in field surveys, in order to allow transport and improve feasibility. In an attempt to use a solid preservative, capable of keeping the morphology of Schistosoma mansoni eggs intact, blocking parasite development, without interfering with the usual glycerin clarification method, the authors have added 2-3 mg sodium azide (NaN3) to stools. Each specimen contained about 2 g stools and was obtained from patients, who eliminated a known egg burden, determined by the Kato-Katz' technique. Stools with sodium azide were kept at room temperature and submitted to subsequent egg counts after one, two, four, eight and twelve weeks. Examinations were carried out in 53 stool specimens and showed that egg structure was preserved and egg counts remained almost identical in 51 of them. Two specimens, examined after eight and twelve weeks, where dehydrated and unsuitable for egg counts. Therefore the authors regard sodium azide as an adequate chemical preservative for stool specimens to be submitted to egg counts by the Kato-Katz' technique.